Behandling av neurologiska sjukdomar försvåras av ett skyddande, semipermeabelt membran endotelceller som åtskiljer cirkulerande blod från hjärnparenkymen. Blod-hjärnbarriären fyller en livsviktig funktion av att förhindra intrång av patogener och toxiner, samtidigt orsakar den begränsat upptag av biologiska läkemedel. Tidigare forskning vid KTH har studerat möjligheten till att utnyttja den naturliga receptormedierade endocytosen för att korsa blod-hjärnbarriaren.

Med detta som grund har varianter med introducerade mutationer i nyckelpositioner framställts med målet att förbättra affinitet och stabilitet. I detta arbete har egenskaperna av dessa nya varianter karaktäriserats. Efter uttryck av konstrukten i Escherichia coli har proteinerna isolerats genom affinitetskromatografi med immobiliserade metalljoner (IMAC). Varianternas egenskaper har sedan validerats med MALDI-TOF masspektrometri, SDS-PAGE och cirkulär dikroism. Cytotoxiska effekter hos affikroppskonstrukten mot murina endotelceller (bEnd.3) har studerats under kort- och lång exponering. Inbindning och affinitet har undersökts med flödescytometri mot SKOV-3 humana livmoderhalscancer-celler.

Treatment of neurological disorders is made complicated by the existence of a protective sheet of semipermeable endothelial cells that separates circulating blood from the brain parenchyma. While this blood-brain barrier (BBB) serves a vital function of restricting entry to pathogens and toxins, it also limits access to biopharmaceuticals. Earlier efforts at KTH have investigated utilization of the native pathways of receptor-mediated transcytosis to cross the blood-brain barrier.

Using these as a basis, affibodies proteins with mutations in key sites have been derived, in the quest for improved characteristics in affinity and stability. Here, the properties of these new variants are characterized. After expression of these constructs in Escherichia coli, the proteins are isolated by immobilized metal affinity chromatography (IMAC). The variants are then validated by MALDI-TOF mass spectrometry, SDS-PAGE and circular dichroism. Cytotoxic effects of the affibody constructs to murine endothelial (bEnd.3) cells are studied over short- and long exposure-times. Target affinity is studied by flow cytometry measurements with SKOV-3 human ovarian cancer cell-lines.