During the last decade, T lymphocytes have been used for cancer immunotherapies due to their highly cytotoxic capacity and ability to prolong survival in cancer patients. The enhancing of their functionality has been challenging due to the lack of a system that can produce gene editing with high accuracy and efficiency. With the intention of developing a system that provides accurate spatiotemporal control, a novel designed retroviral system called Blue VIPR that uses optogenetics and clustered regularly interspaced short palindromic repeats CRISPR/Cas-system, is here investigated.

For this purpose, a total of three viral architectures based on the Blue VIPR system, were used for transduction of murine Cas9⁺ T lymphocytes with the aim of producing knockouts. Optimization of the transduction efficiency was performed in Murine Embryonic Fibroblasts, as well as a comparison and analysis of the effects that these architectures provoke when used at different viral titters. Results shows that the novel BluVIPR is a powerful retroviral system that is able to produce knockouts in > 90% of the population of T lymphocytes that is both transduced and activated (Thy1.1⁺ and mCherry⁺).

Under det senaste decenniet har T lymfocyter använts i cancer immunterapi på grund av sin höga cytotoxiska kapacitet och förmåga att förlänga överlevnad bland cancerpatienter. Förbättringen av T lymfocyters funktionalitet har varit utmanande genom  åren  tillföljd av bristen av  ett  system som  kan  producera genredigering med hög specificitet och effektivitet. I avsikt att utveckla ett system som ger en noggrann spatiotemporal kontroll, utforskas här ett nydesignat system: Blue VIPR som använder optogenetik samt det Grupperade och jämnt utspridda korta palindromiska repeterade sekvenser (CRISPR)-Cas systemet.

I detta syfte, användes totalt tre strukturer baserade i BluVIPR systemet, för transduktionen av murina Cas9⁺ T-lymfocyter med strävan att producera gen-knockout. Utöver transduktionseffektivitetsoptimeringen som genomfördes i mus Embryonala Fibroblastceller, utfördes även en jämförelse och analys av effekterna som orsakas av dessa strukturer när olika viral titer användes. Resultatet visade att det nya Blue VIPR är ett starkt retrovirus sytem som kan producera gen-knockout i > 90% av T-lymfocyt populationen som är både transducerade och aktiverade (Thy1.1⁺ and mCherry⁺).