Octapharma produces immunotherapeutic drugs, including liquid IgG (immunoglobulins) formulations used for intravenous administration in patients with immune deficiencies or autoimmune disorders. Prior to release, each batch undergoes extensive quality control testing and one such analysis is the Test for Anticomplementary Activity (ACA), which ensures that the drug does not activate the complement system upon administration. Such nonspecific complement activation may result in side effects such as fever, dizziness and muscle pain, and is associated with IgG aggregation in these intravenous IgG (IVIg) products. However, the ACA method has several limitations, including low throughput, reagent dependency, and low efficiency, which has led Octapharma to explore alternative methods across several projects. Among these, the sMAC ELISA method showed promising results for detecting complement activation. This work aims to further investigate this method by incubating IVIg samples with human serum, to induce potential complement activation, and measure the resulting signal using sMAC ELISA. 

Three sMAC ELISA kits were assessed and compared in this study: Bio-Techne’s Human C5b-9 ELISA Kit (Colorimetric), Creative Biolab’s Human C5b-9 Terminal Complement Complex ELISA Kit-CTK-349 and Svar’s Complement TCC- RUO. In addition, two different diluents were evaluated: Diluent CP from the WIESLAB® Complement Classical Pathway COMPLCP310 from SVAR and Gelatin Veronal Buffer with Mg & Ca (GVB++) by Novatein Biosciences.

In conclusion, this work demonstrates that the sMAC ELISA kit from Svar, when combined with the DilCP diluent, generates results that align with existing literature, indicating it could be a suitable replacement for the ACA method. The Svar kit used with the GVB++ buffer produced results that were somewhat inconsistent with existing literature, implying further investigation is required. The Bio-Techne kit produced values in line with theoretical expectations, but exhibited greater variability, while the Creative biolabs kit failed to yield detectable signal for the samples included. Further investigation is required to determine to what extent these findings correlate with the ACA method.

Octapharma tillverkar immunterapeutiska läkemedel i form av flytande IgG-formuleringar (immunoglobuliner), avsedda för intravenös administrering till patienter med immunbristsjukdomar eller autoimmuna sjukdomar. Innan frisläppning genomgår dessa läkemedel omfattande kvalitetskontroller, däribland Test för Antikomplementär Aktivitet (ACA), vilket säkerställer att produkterna inte aktiverar komplementsystemet vid administrering. Sådan ospecifik komplementbindning kan leda till biverkningar såsom feber, yrsel och muskelvärk, och associeras med bildandet av IgG aggregat i intravenösa IgG (IVIg) läkemedel. ACA metoden har dock flera begränsningar, däribland låg kapacitet och effektivitet samt hög känslighet för variationer inom reagenserna. Detta har lett Octapharma till att, genom olika projekt, söka efter en metod som kan ersätta ACA metoden. En metod som visat lovande resultat är sMAC ELISA, och syftet med detta arbete är att vidare undersöka om denna metod kan ersätta ACA metoden. Detta gjordes genom att tillsätta humant serum till olika IVIg-prover för att inducera potentiell komplement-aktivering och sedan mäta denna med sMAC ELISA metoden.

Tre olika sMAC ELISA kit jämfördes i studien: Bio-Technes Human C5b-9 ELISA Kit (Colorimetric), Creative Biolabs Human C5b-9 Terminal Complement Complex ELISA Kit-CTK-349 och Svars Complement TCC- RUO samt två olika buffertar: Diluent CP buffer från WIESLAB® Complement Classical Pathway COMPLCP310kit från SVAR och Gelatin Veronal Buffer with Mg & Ca (GVB++) från Novatein Biosciences. 

Detta arbete visar att sMAC ELISA kitet från Svar, i kombination med DilCP bufferten genererar resultat som överensstämmer med teorin och därmed kan vara en lämplig ersättare till ACA metoden. Svar-kitet tillsammans med GVB++ bufferten gav resultat som delvis avvek från litteraturen, vilket indikerar ett behov av ytterligare testning. Biotechne-kitet gav resultat i linje med litteraturen men uppvisade större variation, medan kitet från Creative biolabs inte gav någon detekterbar signal för proverna. Ytterligare studier krävs för att fastställa hur dessa resultat förhåller sig till ACA metoden.